Quantitative Label-Free Higher Harmonic Generation Microscopy for 3D and 4D Analysis of Tissue Structure and Dynamics
"Ik gebruikte een etiketvrije microscopietechniek (HHGM) om cellen en de weefselmatrix eromheen (ECM) in modellen van de botziekte OI, het bindweefselziektebeeld EDS en longaandoeningen zichtbaar te maken en te analyseren. Zo ontrafelen wij hoe deze ziekten in elkaar zitten.
"HHGM levert "directe pathologie": binnen enkele minuten zijn cellen en structuren in vers weefsel te zien – veel sneller dan de klassieke H&E‑kleuring. Oude methoden zoals immuunkleuring of elektronenmicroscopie zijn statisch en tijdrovend; levend‑celkleuring brengt weer schadelijke kleurstoffen en lichtschade met zich mee, die cellen kunnen veranderen en slechts korte opnames toelaten. Mijn doel: HHGM doorontwikkelen tot dynamische vierdimensionale (4D) opnames van levend weefsel, en bepalen wat daarvoor nodig is.
"We tonen aan dat etiketvrije HHGM een goed hulpmiddel is om 3D‑kweken van bindweefselcellen (fibroblasten) te onderzoeken en collageendefecten in de matrix te meten die ontstaan door OI‑ en EDS‑genmutaties.
"Verder blijkt dat volledig etiketvrije 4D‑HHGM beelden kan opnemen van elastine en collageen, contacten tussen cellen en celbeweging in verse, nauwkeurig gesneden longcoupes (PCLS) uit de mens – vastgelegd als filmpjes over een periode van maar liefst vijf dagen."
Meer informatie over het proefschrift volgt.